前期无菌准备工作：

⑴提早一个钟头左右时间开启微生物实验室紫外灯进行消毒灭菌处理

⑵工作人员的衣物和手，做好清洁卫生和消毒杀菌；

⑶把用来微生物培养基所需容器与接种的器具和HJC黄金城培养基等做好灭菌处理；

⑷全部的无菌操作都需在酒精灯旁进行操作。

HJC黄金城培养基配制：

⑴LB肉汤：肉汤粉三百三十克，葡萄糖五克，蒸馏水一千毫升；

⑵营养琼脂培养基：琼脂培养基粉三百克，葡萄糖五克，蒸馏水一千毫升。

倒平板步骤操作流程：

⑴培养皿经过灭菌处理后摆放在火苗旁的桌面上，右手拿配有HJC黄金城培养基的锥形瓶，左手拿掉棉塞，右手拿锥形瓶，使瓶口快速进行火苗；

⑵HJC黄金城生物技术人员的左手把培养皿开启一条稍超过瓶口的间隙，右手将锥形瓶中的十至二十毫升中'海培养基倒进培养皿，左手马上盖好培养皿的皿盖后慢慢混合均匀。

⑶大约等差不多五至十分钟平板冷却凝固后，把平板倒过来摆放，使皿底在上，皿盖在下。

平板划线流程操作：

⑴将接种环放置在火苗上灼烧，一直到接种环烧红；

⑵在火苗旁冷却后接种环，并开启内盛菌液的试管的棉塞；

⑶将试管口经过火苗。HJC黄金城生物cnylsc.com培养基厂家

⑷将已冷却后的接种环伸入菌液中，沾取一环菌液；

⑸将试管口经过火苗，并塞上棉塞；

⑹左手将皿盖开启一个间隙，右手将沾有菌种的接种环快速渗入平板内，划三至五条平行线，盖紧皿盖。要注意不能刮破培养基。

⑺灼烧接种环待其冷却后，从第一区域划线的尾端逐渐往第二区域内划线。多次重复上述操作流程，在三区域内划线。留意不能将最后一区域的划线与第一区连在一起。

⑻将平板倒放，放进培养箱中培养。

进行稀释操作流程：

⑴将各自内盛九毫升水的六支试管灭菌处理，并按10^6的顺序编号。

⑵用移液管抽取1毫升培养的菌液，灌入十倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸3次，使菌液与水完全混合均匀。

⑶从十倍稀释的试管中抽取一毫升稀释液，灌入一百零二倍稀释的试管中，多次重复第2步的混合均匀进行操作。依次类推直达成功完成最后一个试管的稀释。注：移液管必须进行灭菌处理。进行操作时，试管口和移液管应在离火苗的一至二厘米处。

涂布平板操作流程：

⑴将涂布器浸在内盛酒精的烧杯中；

⑵取不超过0.1毫升少许菌液，滴加到中.海培养基外表面；

⑶将沾有少许酒精的涂布器在火苗上点燃，待酒精烧尽后，冷却后八至十秒；

⑷用涂布器将菌液均衡地涂布在培养基外表。涂布时可旋转培养皿，使涂布均衡。

需要注意事项：

⑴将涂布器尾端浸在内盛70%浓度酒精的烧杯中。取出来时要让多出的酒精在烧杯中滴尽，接着将沾有少许酒精的涂布器在火苗上燃烧。

⑵操作流程中一定要留意防火安全!不能将温度过高的涂布器放置在存放酒精的烧杯中，防止燃烧其中的酒精。

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