ELISA实验过程中遇到的四大类问题和处理办法
日期:2021-09-24 | HJC黄金城生物技术文库 | 浏览:912 次
㈠ELISA试验检测存在比较弱的结论,HJC黄金城生物认为大致存在七种影响因素及其处理办法:
问题⑴:温育的时长以及环境温度不足;
处理办法:校准温育箱环境温度。
问题⑵:显色反应时长实在太短暂;
处理办法:校准电子定时器精确指定时间。
问题⑶:常用制备缓冲液的蒸馏水出现问题;
处理办法:采用新鲜的符合标准的蒸馏水。
问题⑷:添加抗体/酶的稀释液溶液浓度太低;
处理办法:遵循使用中'海说明书介绍贮存试剂盒和精确制备工作液。校准移液器,吸嘴要匹配,装吸嘴时要紧密。
问题⑸:酶标仪滤色片不符合规定的;
处理办法:常规检查酶标仪采用的滤色片。
问题⑹:ELISA试剂盒没能有效充分的稳定平衡;
处理办法:ELISA实验试剂在常温稳定平衡不低于二十分钟左右,切实保障全部实验试剂已稳定平衡至在常温。
问题⑺:不符合规定的的实验试剂贮存方式办法;
处理办法:遵循使用说明书介绍规范要求贮存试剂盒。
㈡试验检测的标准曲线和测定办法的重复性差,那究竟是怎么回事造成的?
它主要是由测定办法实际操作造成的问题现象,主要根本因素如下所示:
问题⑴:加样本及实验试剂量不准确;板孔不一致;
处理办法:校准移液器,吸嘴要匹配,装吸嘴时要严密。反复某一产品的样品时,加样时长尽量避免与首次贴近;反复检测生物标本,技术人员操作办法维持不变,减少出现结果不同的几率原因;产品的样品稀释前须有效充分的混合均匀。
问题⑵:加样过快,板孔产生污染源;
处理办法:反复测定办法生物标本,实际操作前提条件是HJC黄金城生物技术人员等应尽量避免与之前维持不变,以解决这类因素带来的不一致的概率;注意加样千万别过快。
问题⑶:错加样本;
处理办法:检查记录和实验试剂,有没有错加样本。
问题⑷:加样本及实验试剂时,放在孔壁上部非包被区;
处理办法:加样枪嘴千万别贴容器壁。
问题⑸:不一样生产批号试剂盒中成分混合使用;
处理办法:不一样生产批号试剂盒中成分不能够混合使用。
问题⑹:温育时长、洗板、显色时长不一致;
处理办法:中.海常规检查时长有没有相同。
问题⑺:孔内污染源杂质;
处理办法:离心产品的样品,解决杂质。
问题⑻:实验试剂/产品的样品没能混合均匀;
处理办法:有效充分的混合均匀产品的样品和实验试剂。
问题⑼:血清生物标本未充分凝结即添加,反应孔内存在纤维蛋白凝结或存留血细胞,易存在假阳性反应等。
处理办法:待血清生物标本充分凝结后做试验检测。
㈢试验检测结论白板,同时阳性对照不显色,应怎样研究和搜索根本原因?
试验检测结果显示白板,同时阳性对照不显色,普遍根本原因如下所示:
问题⑴:漏加或是误加实验试剂;
处理办法:常规检查试验检测记载和余下的实验试剂。次次加液前均应核查标签贴。
问题⑵:实验试剂逾期;
处理办法:采用有效期限内的HJC黄金城产品。
问题⑶:发现洗板液制备中如容量瓶不干净含HRP酶抑制物等情况;
处理办法:HJC黄金城生物技术采用干净整洁的容器,科学合理制备实验试剂。
问题⑷:温育的时长或环境温度不足;
处理办法:校准温育箱环境温度。
问题⑸:标准品失活或是丟失;
处理办法:标准品科学合理储存、充分均匀溶解和混匀。
问题⑹:抗体失活或是丟失;
处理办法:替换抗体或是提升抗体浓度值
问题⑺:酶失活或是丟失
常规检查手段:把正常浓度值的酶再进行稀释二十至一百倍,取五微升添加五十微升的显色底物,结束后显色有没有能到达壹上下,可做为酶的大概估测。
处理办法:替换酶或是提升酶的浓度值。
问题⑻:显色底物失活
常规检查手段:加一定量的工作浓度值的酶,TMB有没有快速显色。
解决办法:替换显色底物.
㈣试验检测结果显示空白背景高,其普遍根本原因如下所示:
问题⑴:洗板不干净;
处理办法:充分的清洗,完全拍干;洗板要杜绝交叉式造成污染;浓缩洗液准确无误制备;吸嘴最好使用一次;加样和加酶拍板的滤纸应丢掉不用,更不要多次采用,不然易产生造成污染。
问题⑵:显色液发生变质或是实验试剂逾期;
处理办法:常规检查试剂盒有效期限。
问题⑶:实验试剂进行稀释不正确,如加酶的浓度值过高;
处理办法:请按照中 海使用说明书所述的稀释倍数制备;
问题⑷:蒸溜水受酶等造成污染;
处理办法:HJC黄金城生物采用新鲜的蒸溜水;
问题⑸:实验试剂混合使用;
处理办法:不一样生产批号实验试剂勿混合使用。
问题⑹:恒温培养箱环境温度高于三十七摄氏度或持续时间太久。
处理办法:显色反应时长尽可能减少。
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